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PCR,Southern-blot和各種酶切反應(yīng)。

發(fā)布時(shí)間: 2022-09-15  點(diǎn)擊次數(shù): 1655次


三.適用范圍:

    適用于快速提取各種動(dòng)植物細(xì)胞/組織基因組DNA。

四.儲(chǔ)存條件:

1.結(jié)合液CB或者抑制物去除液IR低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀,可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解,恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。

2.為避免降低活性、方便運(yùn)輸,提供蛋白酶K為凍干粉狀,收到后,可短暫離心后,加入1ml滅菌水溶解,因?yàn)榉磸?fù)凍融可能會(huì)降低酶活性,因此溶解后立即按照每次使用量(20微升)分裝凍存,-20℃保存。

3.避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH值變化,各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。

五.注意事項(xiàng):

1.所有的離心步驟均在室溫完成,使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13,000rpm的傳統(tǒng)臺(tái)式離心機(jī),如Eppendorf 5415C 或者類似離心機(jī)。

2.需要自備1XPBS(磷酸鹽緩沖液),和異丙醇。

3.實(shí)驗(yàn)前將需要的水浴先預(yù)熱到70℃?zhèn)溆谩?/span>

4.結(jié)合液CB 和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物,操作時(shí)要戴乳膠手套,避免沾染皮膚,眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí),要用大量清水或者生理鹽水沖洗。

5.洗脫液EB不含有螯合劑EDTA,不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫,但應(yīng)該確保批pH大于7.5, pH過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA應(yīng)該保存在-20℃。DNA如果需要長(zhǎng)期保存,可以用TE緩沖液洗脫(10mM Tris-HCl, 1mM EDTA,pH 8.0),但是EDTA可能影響下游酶切反應(yīng),使用時(shí)可以適當(dāng)稀釋。



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